2×SYBR Green qPCR Mix (Low ROX)熒光定量
2x SYBR Green qPCR Mix (Low ROX) 是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑，為2x 預(yù)混液，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟，縮短加樣時(shí)間，降低污染幾率。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶2×SYBR Green qPCR Mix (Low ROX)熒光定量
2x SYBR Green qPCR Mix (Low ROX)
2×SYBR Green qPCR Mix (Low ROX)熒光定量
目錄號(hào):71610
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71610-500 500 rxns (20 μl/rxn) | 71610-2500 2500 rxns (20 μl/rxn) |
2x SYBR Green qPCRMix(LowROX) | 1.25 ml x4 | 1.25 ml x20 |
RNase-Free H2O | 5 ml | 5 ml x5 |
保存條件
-20℃保存，有效期 24 個(gè)月。使用前，充分融解，輕輕顛倒混勻，短期使用可放在 4 ℃，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
2x SYBR Green qPCR Mix (Low ROX) 是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑，為2x 預(yù)混液，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟，縮短加樣時(shí)間，降低污染幾率。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶，配合精心優(yōu)化的Buffer體系，有效抑制非特異性擴(kuò)增，可對(duì)寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。
預(yù)混液中已加入低濃度ROX參比染料，適用于ABI 7500，7500 Fast, QuantStudio 3/5 System, ViiA™7, QuantStudio 6/7Flex；Stratagene MX4000, MX 3005, MX 3000；Corbett Rotor Gene 3000等需要低濃度ROX機(jī)型。
操作步驟：
1. 將DNA模板、引物、2x SYBR Green qPCR Mix (Low ROX)、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用。
2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2x SYBR Green qPCR Mix (Low ROX) | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
RNase free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%，基因組DNA的量為10-100 ng。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同，可對(duì)模板進(jìn)行梯度稀釋，以確定最佳的模板使用量。
2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM，就可以得到較好的結(jié)果，反應(yīng)效果不佳時(shí)可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。
3. qPCR反應(yīng)程序
注意：
1） 絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。一般來(lái)說(shuō)，二步法擴(kuò)增特異性高，三步法擴(kuò)增效率高。如果融鏈曲線較差，可以嘗試兩步法擴(kuò)增或提高退火溫度；如果因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，可嘗試加長(zhǎng)延伸時(shí)間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增。
2） 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定；
3） 延伸（退火&延伸）時(shí)間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時(shí)間自行調(diào)整。
4） 融解曲線分析請(qǐng)以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定。
相關(guān)產(chǎn)品：
91011 RNAzol Reagent（Trizol）
91013 通用型總RNA快速提取試劑盒（TRIzol+吸附柱） 免氯仿，升級(jí)版
91017 動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲(chóng)總RNA快速提取試劑盒() 免氯仿，同RNeasy Mini Kit
91218 動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲(chóng)總RNA快速提取試劑盒(帶gDNA過(guò)濾器) 免氯仿，同RNeasy Plus Mini Kit
91019 植物總RNA提取試劑盒 免氯仿，同RNeasy Plant Mini Kit
91318 多糖多酚植物總RNA快速提取試劑盒(帶gDNA過(guò)濾器) 免氯仿
91513 果實(shí)/種子總RNA快速提取試劑盒(帶gDNA過(guò)濾器) 難題樣本：果實(shí)、種子、中草藥等
71118 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（With dsDNase） 同RT reagent Kit
71514 Script III RT Kit With gDNA Eraser 同RT reagent Kit with gDNA Eraser
71519 2x SYBR Green qPCR Mix (With 100x ROX) 同TB Green Premix Ex Taq
71710 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase 同T公司的AE341，V公司的R333
71600 2x Universal SYBR Green qPCR Mix 同V公司的Q711
2×SYBR Green qPCR Mix (Low ROX)熒光定量
