動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲總RNA快速提取試劑盒
適用于快速提取各種動(dòng)物組織、細(xì)胞、昆蟲的總RNA，gDNA過(guò)濾器高效濾除gDNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、RACE 等。動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲總RNA快速提取試劑盒
FlashPure Plus Tissue/Cell/Insect Total RNA Mini Kit 動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲總 RNA 提取試劑盒（帶 gDNA 過(guò)濾器）
動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲總RNA快速提取試劑盒
目錄號(hào)：91218
產(chǎn)品內(nèi)容
產(chǎn)品成份 | 91218-50（50 次） |
裂解液 ARL Plus | 30 ml |
去蛋白液 RW1 | 40 ml |
漂洗液 RW | 10 ml（需加入指ding量無(wú)水乙醇） |
70%乙醇 | 9 ml（需加入指ding量無(wú)水乙醇） |
RNase-Free H2O | 10 ml |
gDNA 過(guò)濾器和收集管 | 50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5 ml 離心管 | 50 支 |
RNase-Free 2.0 ml 液氮研磨管 | 50 支 |
自備試劑
無(wú)水乙醇
保存條件
室溫（15~25℃），有效期 12 個(gè)月。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
適用于快速提取各種動(dòng)物組織、細(xì)胞、昆蟲的總RNA，gDNA過(guò)濾器高效濾除gDNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、RACE 等。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 無(wú)毒：免氯仿、免β-巰基乙醇！
2. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
3. 高效：提取全過(guò)程僅需 10 min！
重要提示：
① 第一次使用前，請(qǐng)先在漂洗液RW中加入無(wú)水乙醇，詳見(jiàn)標(biāo)簽。
② 所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進(jìn)行。
③ 高豐度樣本（肝臟、脾臟、腎臟、胰腺、心臟）的投入量減半。
操作步驟：
1. 動(dòng)物組織、昆蟲：
a．電動(dòng)勻漿：取新鮮組織 10~20 mg 加入 350μl的裂解液ARL Plus，電動(dòng)勻漿，直到無(wú)明顯組織塊即可。
b．液氮研磨：在液氮中研磨組織成細(xì)粉，取10~20 mg組織細(xì)粉加入350μl裂解液ARL Plus，劇烈渦旋振蕩20sec，充分裂解。
注意：裂解 20~30 mg 組織，需要加入 600 μl 裂解液 ARL Plus。
c． 將勻漿后裂解物13，000 rpm 離心3min。
d．下接步驟 3。
2. 細(xì)胞
a．懸浮細(xì)胞：收集<107懸浮細(xì)胞到一個(gè) 1.5ml 離心管；
貼壁細(xì)胞（培養(yǎng)皿培養(yǎng)）：wan全吸棄培養(yǎng)基后，直接在培養(yǎng)皿中加入裂解液ARL Plus進(jìn)行消化、裂解；
貼壁細(xì)胞（細(xì)胞瓶培養(yǎng)）：應(yīng)該先用胰蛋白mei消化后吹打下來(lái)收集。
b．13,000rpm 離心10sec，wan全吸棄上清，留下細(xì)胞團(tuán)。
c．輕彈管底使細(xì)胞松散，然后加入350μl（<5x106 細(xì)胞）或600μl（5x106-1x107細(xì)胞）裂解液ARL Plus，渦旋振蕩，充分混勻。
d．下接步驟 3。
貼壁細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)量表：（細(xì)胞數(shù)量＞1x107，請(qǐng)酌情增加裂解液的用量）
培養(yǎng)器皿 | 面積（cm2） | 培養(yǎng)液量 （ml） | 細(xì)胞數(shù)量 |
96 孔培養(yǎng)板 | 0.32 | 0.1 | 105 |
24 孔培養(yǎng)板 | 2 | 1.0 | 5×105 |
12 孔培養(yǎng)板 6 孔培養(yǎng)板 3.5cm 培養(yǎng)皿 | 4.5 9.6 8 | 2.0 2.5 3.0 | 106 2.5×106 2×106 |
6cm 培養(yǎng)皿 | 21 | 5.0 | 5.2×106 |
9cm 培養(yǎng)皿 | 49 | 10.0 | 1.22×107 |
25cm 培養(yǎng)瓶 75cm 培養(yǎng)瓶 100cm 玻璃培養(yǎng)瓶 | 25 75 33 | 5.0 15～30 10 | 5×106 2×107 7x 106 |
3. 將裂解物上清或者裂解物全部加到gDNA 過(guò)濾器上（過(guò)濾器放在收集管內(nèi)），立刻 13,000 rpm 離心1 min，保留濾液（RNA 在濾液中）。
4. 向?yàn)V液中加入等體積（350μl/600μl）的70%乙醇，吹打混勻。
5. 每次吸取≤750μl濾液混合物轉(zhuǎn)入一個(gè)RNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm離心1min，倒棄濾液。此時(shí)，RNA被吸附在膜上，重復(fù)此過(guò)程，直到溶液全部上柱。
6. 加入700μl去蛋白液 RW1,室溫放置 1min,13,000 rpm 離心30sec，倒棄濾液。
7. 加入500μl漂洗液 RW，13,000 rpm 離心30sec，倒棄濾液。
8. 重復(fù)步驟7。
9. 把RNA吸附柱放回收集管中，13,000rpm 離心2min，che底除去膜上的乙醇。
10. 取出RNA吸附柱，放入一個(gè)RNase-free 1.5ml離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加30-50μl RNase-Free H2O，室溫放置1min，13,000rpm離心1min。
11. 得到的RNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，以免降解。
附錄：
一、免液氮直接研磨（自動(dòng)研磨儀）——適用于新鮮樣本
a. 在2.0ml 液氮研磨管中加入4mm兩粒，加600μl裂解液ARL plus，放進(jìn)20mg左右的樣本，設(shè)置65個(gè)頻率，震蕩2min。
b. 將裂解物13,000rpm離心3min，沉淀不能裂解的碎片。
二、液氮研磨（自動(dòng)研磨儀）:
a. 把研磨模塊丟到液氮中預(yù)冷，直到?jīng)]有氣泡冒出視為預(yù)冷完畢。
b. 在2.0ml液氮研磨管中放入3mm鋼珠3粒，放進(jìn)20-30mg 樣本，投入液氮中預(yù)冷。
c. 把預(yù)冷好的離心管插入研磨模塊中，放進(jìn)研磨儀，設(shè)置 55 個(gè)頻率，震蕩30~60sec。（以北京赫得研磨儀——京 N9548 為例）
d. 研磨完成后，馬上加600μl裂解液ARL Plus，劇烈渦旋振蕩,充分混勻。
e. 將裂解物13,000rpm離心3min，沉淀不能裂解的碎片。
相關(guān)產(chǎn)品：
71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）
71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）
71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)
動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲總RNA快速提取試劑盒
