NobleRyder 蛋白銀染試劑盒
NobleRyder 蛋白銀染試劑盒 NobleRyder 即用型液體試劑 P2825-20T
蛋白銀染試劑盒
產(chǎn)品簡介：
蛋白銀染試劑盒(Protein Silver Stain Kit)是一種比較快速的可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白銀染染色的試劑盒，該試劑盒含有增敏步驟，可明顯降低背景。其優(yōu)點還在于：1、操作簡單、快速；2、可用于2D凝膠的銀染，并可進行后續(xù)的質(zhì)樸檢測；3、目的條帶清晰；4、不含甲醇。Protein Silver Stain Kit與Protein Fast Silver Stain Kit相比，前者檢測靈敏度更高，尤其是在檢測小分子量蛋白質(zhì)的時候，但后者操作速度更快。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
NobleRyder 蛋白銀染試劑盒
產(chǎn)品組成：
編號 名稱 | P2825 20T | Storage |
試劑(A): Silver Fixaton buffer(5×) | 100ml | RT 避光 |
試劑(B): Sil ilver Stain Sensitizer(5×) | 100ml | RT 避光 |
試劑(C): Silver Stain | 2×250ml | RT 避光 |
試劑(D): Silver Stain Enhancer(25×) | 2×10ml | RT 避光 |
試劑(E): Silver Stain Developer(5×) | 100ml | RT 避光 |
試劑(F): Silver Stain Stop Buffer(10×) | 100ml | RT |
使用說明書 | 1份 | |
自備材料：
1.水平搖床或側(cè)擺搖床
2.去離子水(超純)、乙醇、冰乙酸
操作步驟(僅供參考)：
1.準備工作：以下操作以8.5×5.5cm、厚度為1.0mm的凝膠為例，以凝膠全部浸沒到溶液為準，一般用量是25～50ml，對于凝膠體積較大的，各溶液的使用量需按凝膠體積比例放大。整個銀染過程均應(yīng)在搖床上持續(xù)搖動進行，搖床轉(zhuǎn)速控制在60～70rpm。提前配制固定液，固定液A按無水乙醇:冰乙酸:去離子水=5:1:4的比例配制，固定液B按無水乙醇:冰乙酸:去離子水=1:1:18的比例配制。
2.水洗：電泳結(jié)束后，取凝膠放入去離子水中，搖床上清洗2次，每次5min。
3、固定：棄液，取凝膠放入50～100ml固定液A中，在搖床上室溫搖動1h；取凝膠放入50～100ml固定液B中，在搖床上室溫搖動2h至過夜；取凝膠放入50～100ml去離子水中，在搖床上室溫搖動5min；取凝膠放入25ml1×Silver Fixaton buffer中，在搖床上室溫搖動30min。(1×Silver Fixaton buffer，即取Silver Fixaton buffer (5×)5ml加入到20ml去離子水中，混勻，即1×Silver Fixaton buffer，一般應(yīng)24h內(nèi)用完。)
4、水洗：棄固定液，取凝膠放入50～100ml去離子水中清洗32次，每次10min。
6、增敏：棄液。配制銀染增敏工作液，即取Silver Stain Sensitizer 5×)5ml加入到20ml去離子水中，混勻，即1×Silver Stain Sensitizer，一般應(yīng)2h內(nèi)用完。室溫下用1×Silver Stain Sensitizer孵育凝膠2次，每次30min。立即用去離子水清洗凝膠4次，每次15min。
7、銀染：配制銀染工作液，即取1ml Silver Stain Enhancerl加入到24m Silver Stain中，混勻，即得銀染工作液，一般應(yīng)2h內(nèi)用完。取凝膠入銀染工作液，在搖床上室溫搖動30min。
8、水洗：棄液，在搖床上用去離子水清洗凝膠4次，每次4min。
9、顯影：配制銀染顯影工作液，即取Silver Stain Developer(5×)5ml加入到20ml去離子水中，混勻，即1×Silver Stain Developer，一般應(yīng)30min內(nèi)用完。清洗凝膠后，立即置于1×Silver Stain Developer中，室溫孵育5～10min，直至蛋白條帶清晰可見。一般顯色30s后就會出現(xiàn)棕色沉淀，繼續(xù)顯影2～3min，亦可延長至5min以上，如果顯影效果不佳，可重新更換1×Silver Stain Developer繼續(xù)顯影。
注意事項：
1、背景過深：①顯色時間過長；②洗滌不充分；③凝膠中殘留物質(zhì)未去除干凈；④去離子水的純度過低。
2、蛋白條帶較淺：①蛋白的半guang氨酸含量過低；②銀染后水洗時間過長；③蛋白量較低；④固定后的洗滌時間不夠，導(dǎo)致乙酸殘留。
3、凝膠上出現(xiàn)雜質(zhì)或非蛋白的印跡：①凝膠沒有被充分浸沒，應(yīng)加入足量溶液；②容器沒有清洗干凈；③凝膠接觸金屬物質(zhì)；④指紋或其他壓跡。
4、本染色液呈酸性，有輕微腐蝕性，使用時請作必要防護。
有效期： 3個月有效。
NobleRyder 蛋白銀染試劑盒
