概述

糖苷內(nèi)切酶 H 是一種重組糖苷酶，能夠?qū)?/span> N- 糖蛋白中的高甘露糖型和某些雜合型寡聚糖的殼二糖核心結構進行切割（ 1 ）。

反應條件

在糖蛋白變性緩沖液（含 5% SDS ， 40 mM DTT ）中 100 ℃ 煮沸 10 分鐘使糖蛋白變性。在 1X G5 反應緩沖液 [50 mM 檸檬酸鈉（pH 5.5 @ 25 ℃ ） ] 中于 37 ℃ 溫育，以進行酶解反應。

隨酶提供的試劑

10X 糖蛋白變性緩沖液 
10X G5 緩沖液

分子量

Endo H ： 29 kDa

*

無外切糖苷酶污染，無蛋白水解活性。

單位定義

1 單位指在 10 μl 的反應體系中， 37 ℃ 條件下 1 小時從 10 μg 變性 RNase B 中除去超過 95% 的碳水化合物所需要的酶量（ 10 NEB units = 1 IUB milliunit ）。

濃度

Endo H ： 500,000 units/ml

貯存條件

20 mM Tris-HCl （ pH 7.5 @ 25 ℃ ）， 50 mMNaCl 和 5 mM Na₂EDTA ，貯存于 -20 ℃ 。

使用注意

酶的活性不受 SDS 抑制。

要使天然糖蛋白去糖基化，或許需要增加酶量和延長溫育時間。

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